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1、天然泉水水源水大腸菌群推測性、確證性檢驗作業指導書編 制： 審 核： 批 準： 版 本 號: ESZAQDGF001 編 制： 審 核: 批 準： 發 布： 二XX年X月1.0 水源水1.1 范圍本法適用于天然泉水水源水大腸菌群的檢驗。1.2 原理根據大腸菌群細菌具有的生物特性，如革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在37培養24h能發酵乳糖并產氣的特點，將不同量的水樣接種到含乳糖的培養基中，經培養后根據陽性反應結果可測出原水樣中大腸菌群的MPN值。1.3 培養基和試劑1.3.1 乳糖膽鹽發酵培養液。1.3.2 亮綠乳糖膽鹽培養液（BGB）。1.3.3 滅菌生理鹽水。1.4 儀器1.4.1 超凈工作臺。1.2、4.2 高壓蒸汽滅菌鍋。1.4.3 培養箱：361。1.4.4 冰箱：081.4.5 電子天平：感量0.1g。1.4.6 培養皿。1.4.7 小倒管。1.4.8 試管：150mm20mm,140mm15mm。1.4.9 吸管：10mL、5mL、1mL。1.4.10 接種環。1.4.11 酒精燈。1.5 檢測步驟1.5.1 推測性檢驗1.5.1.1 吸取10mL水樣接種到盛有10mL雙料乳糖膽鹽發酵培養液中，共接種5份。1.5.1.2 吸取1mL水樣接種到盛有10mL單料乳糖膽鹽發酵培養液中，共接種5份。1.5.1.3 另吸取1mL水樣接種到9mL滅菌生理鹽水中，混勻，用5mL滅菌吸管吸取5mL3、稀釋液，分別加到5支盛有10mL單料乳糖膽鹽發酵培養液中，每管1mL（即0.1mL水樣）。輕搖試管，使液體充分混合，置361培養箱內培養24h。觀察每支管是否產氣，若有氣體產生該管則為推測性檢驗陽性。如不產氣則為大腸菌群陰性。1.5.2 確證性試驗1.5.2.1 自推測性檢驗陽性管中取一接種環培養液，接種到亮綠乳糖膽鹽培養液（BGB）管中，置361培養箱中培養48h。1.5.2.2 觀察BGB管中的產氣情況，如有氣體產生，就可確定為“大腸菌群陽性”；如無氣體產生則為“大腸菌群陰性”。記下BGB管里產氣的陽性管數，查大腸菌群（MPN）檢索表可得出水樣中大腸菌群的MPN值。1.5.3 MPN值計算4、如水樣含菌量少，也可按100mL、10mL、1mL接種，那么其實際MPN值應為表中的MPN值除以10；反之如含菌量較多，也可接種1mL、0.1mL、0.01mL，其實際MPN值應為表中的MPN值乘以10，余此類推。大腸菌群（MPN）檢索表（總接種量55.5mL，其中5份10mL水樣，5份1mL水樣，5份0.1mL水樣）接種量/mLMPN/100mL接種量/mLMPN/100mL1010.11010.1000010110012102600241038003510410004710512005911010102111601141128012611310013711412014911514015115、120602041218021612210022712312023912415接種量/mLMPN/100mL接種量/mLMPN/100mL1010.11010.10241112517025131308030613110031713212032913315033111341703413135190351514011040814113041914215042111431704313144190441514522045171501305091511505111152170521315319053151542205417155240551920051002201720293152720312320146、204143211720516322202107323242119324272121232531接種量/mLMPN/100mL接種量/mLMPN/100mL1010.11010.12131433017214173312121519332242209333282211233432222143353622317340212241934124225223422823012343322311434436232173454023320350252342235129235253523224015353372411735441242203554524323400132442540117245284022127、50174032525120404302522340536253264101725429411212553241226300841331接種量/mLMPN/100mL接種量/mLMPN/100mL1010.11010.130111414363021341542303164202230420421263052342232310114233831114424443121742550313204302731423431334323951411043345512130434525204943559521704403452294441405231204424752415044354525180444628、53079445695311104504153214045148533180452565342104536453525045472540130455815411705002354222050131543280接種量/mLMPN/100mL接種量/mLMPN/100mL1010.11010.15024354435050358545430504765502405059555135051033552540511465539205126355416005138455516002.0 成品水2.1 范圍本法適用于天然泉水成品水大腸菌群的檢驗。2.2 原理根據大腸菌群細菌具有的生物特性，如革蘭氏陰性無芽胞9、桿菌，在37培養24h能發酵乳糖并產氣的特點，將不同量的水樣接種到含乳糖的培養基中，經培養后根據陽性反應結果可測出原水樣中大腸菌群的MPN值。2.3 培養基和試劑2.3.1 乳糖膽鹽發酵培養液。2.3.2 亮綠乳糖膽鹽培養液（BGB）。2.3.3 滅菌生理鹽水。2.4 儀器2.4.1 超凈工作臺。2.4.2 高壓蒸汽滅菌鍋。2.4.3 培養箱：361。2.4.4 冰箱：082.4.5 電子天平：感量0.1g。2.4.6 培養皿。2.4.7 小倒管。2.4.8 試管：150mm20mm,140mm15mm。2.4.9 吸管：10mL。2.4.10 接種環。2.4.11 酒精燈。2.5 檢測步驟210、.5.1 推測性檢驗2.5.1.1 吸取10mL水樣接種到盛有10mL雙料乳糖膽鹽發酵培養液中，共接種5份。2.5.1.2 輕搖試管，使液體充分混合，置361培養箱內培養24h。觀察每支管是否產氣，若有氣體產生該管則為推測性檢驗陽性。如不產氣則為大腸菌群陰性。2.5.2 確證性試驗2.5.2.1 自推測性檢驗陽性管中取一接種環培養液，接種到亮綠乳糖膽鹽培養液（BGB）管中，置361培養箱中培養48h。2.5.2.2 觀察BGB管中的產氣情況，如有氣體產生，就可確定為“大腸菌群陽性”；如無氣體產生則為“大腸菌群陰性”。記下BGB管里產氣的陽性管數，查用5管10mL水樣時各種陽性和陰性結果組合的MPN值及其95%的可信限表。用5管10mL水樣時各種陽性和陰性結果組合的MPN值及其95%的可信限陽性反應管數MPN/100mL 95%可信限下限上限0006.012.20.112.625.10.519.239.21.629.44163.352.95168.0無限