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1、實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)室工作規(guī)范管理制度編 制： 審 核： 批 準(zhǔn)： 版 本 號(hào): ESZAQDGF001 編 制： 審 核： 批 準(zhǔn)： 版 本 號(hào): 細(xì)胞培養(yǎng)室管理規(guī)章制度細(xì)胞培養(yǎng)室是進(jìn)行各種細(xì)胞培養(yǎng)的凈化級(jí)實(shí)驗(yàn)室，所有進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的人員都必須遵守實(shí)驗(yàn)室有關(guān)的規(guī)章制度，接受實(shí)驗(yàn)室管理人員的管理。第一章 總則第一條 細(xì)胞培養(yǎng)室主要由團(tuán)隊(duì)內(nèi)相關(guān)科研人員使用，原則上不對(duì)外開放，其他人員如確實(shí)需使用細(xì)胞室必須預(yù)先征得實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和細(xì)胞室負(fù)責(zé)人同意。第二條 進(jìn)出細(xì)胞室實(shí)驗(yàn)需要嚴(yán)格登記。如有不符合實(shí)驗(yàn)室工作和生物安全要求的，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和細(xì)胞室工作人員有權(quán)責(zé)令整改。第三條 使用人員需參加專門的細(xì)胞培養(yǎng)室使用規(guī)范培2、訓(xùn)并通過考核后，方可獲準(zhǔn)進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。嚴(yán)禁未經(jīng)許可擅自進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室或使用相關(guān)設(shè)備。第四條 細(xì)胞培養(yǎng)室正常使用過程中，人員進(jìn)出應(yīng)通過緩沖間和風(fēng)淋間；進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的器械和樣品需通過傳遞窗，嚴(yán)禁隨身帶入。實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)盡量一次帶入，嚴(yán)禁將與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的物品帶入實(shí)驗(yàn)室，在細(xì)胞培養(yǎng)室內(nèi)不得進(jìn)行微生物等其它易污染物的培養(yǎng)，禁止從事任何高危生化實(shí)驗(yàn)。第五條 實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)愛護(hù)實(shí)驗(yàn)室各類儀器，按照規(guī)則使用并保持設(shè)備清潔。實(shí)驗(yàn)中的昂貴設(shè)備，未經(jīng)許可不得擅自開關(guān)。精密儀器需經(jīng)專門培訓(xùn)后方能操作未經(jīng)許可不得改變?cè)O(shè)備儀器的預(yù)設(shè)參數(shù)。設(shè)備儀器出現(xiàn)故障或發(fā)生事故，應(yīng)及時(shí)向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人報(bào)告，安排專業(yè)人員進(jìn)行檢修。第二章 條3、例第一條 常規(guī)操作1. 穿著專用實(shí)驗(yàn)服。實(shí)驗(yàn)人員必須在細(xì)胞室緩沖間內(nèi)更換細(xì)胞室專用實(shí)驗(yàn)服，嚴(yán)禁不穿實(shí)驗(yàn)服或直接穿著普通實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)服進(jìn)入細(xì)胞室。2. 穿著專用拖鞋。在準(zhǔn)備間換下自己的鞋子，盡量避免在緩沖間走動(dòng)、停留。3. 細(xì)胞室最多可6個(gè)人同時(shí)使用。4. 實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)禁喧嘩，閑聊，反復(fù)進(jìn)出培養(yǎng)室。第二條 培養(yǎng)箱使用規(guī)則1. 從培養(yǎng)箱取放物品前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開門時(shí)間和減少開門次數(shù)。注：培養(yǎng)箱中的空氣是經(jīng)過過濾的潔凈空氣。長(zhǎng)時(shí)間敞開或頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱，容易造成污染。2. 從培養(yǎng)箱拿取細(xì)胞時(shí)輕拿輕放，動(dòng)作迅速，隨手關(guān)緊培養(yǎng)箱門。未經(jīng)允許，禁止翻看、移動(dòng)他人細(xì)胞或樣品，如有特殊需要的4、，請(qǐng)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人協(xié)調(diào)。3. 培養(yǎng)瓶皿放入培養(yǎng)箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發(fā)后再放入，以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過多乙醇蒸氣。4. 培養(yǎng)箱內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)的放置需整潔有序，方便查找，同時(shí)應(yīng)盡量提高培養(yǎng)箱的使用效率，負(fù)責(zé)老師可視實(shí)驗(yàn)情況啟用或停止空培養(yǎng)箱的使用，節(jié)約資源。5. 普通培養(yǎng)中的細(xì)胞，若非實(shí)驗(yàn)特殊需要，每瓶/板細(xì)胞每天只需要觀察生長(zhǎng)狀態(tài)一次，2人以上共用的細(xì)胞，可約好時(shí)間一起觀察。注：頻繁將細(xì)胞拿出觀察，容易給培養(yǎng)箱造成污染，同時(shí)也會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)條件的恒定。6. 原代細(xì)胞需放置在原代培養(yǎng)專用培養(yǎng)箱培養(yǎng)，不得放置于其他培養(yǎng)箱，如一段時(shí)間內(nèi)無(wú)原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，負(fù)責(zé)人可協(xié)調(diào)安排培養(yǎng)箱供其他細(xì)胞培養(yǎng)使用5、。7. 實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)常注意檢查培養(yǎng)箱溫度、CO2氣體量是否相符設(shè)定值。密切注意培養(yǎng)箱內(nèi)的增濕盤，定期更換無(wú)菌水并進(jìn)行消毒。密切注意培養(yǎng)箱內(nèi)情況，如出現(xiàn)霉變、菌斑、支原體和衣原體感染或其他明顯染菌跡象，應(yīng)立即通知管理員及其它使用者。第三條 顯微鏡使用規(guī)則1. 倒置相差顯微鏡使用前，用酒精棉從中間至周圍擦拭載物臺(tái)。2. 離開細(xì)胞室時(shí)或較長(zhǎng)時(shí)間不需使用時(shí)，及時(shí)關(guān)上電源，延長(zhǎng)燈泡壽命。盡量避免頻繁開關(guān)顯微鏡電源。3. 一次細(xì)胞實(shí)驗(yàn)使用完畢后，在顯微鏡使用記錄本上登記。4. 熒光顯微鏡屬于貴重儀器需遵循貴重儀器預(yù)約使用規(guī)程。第四條 超凈臺(tái)相關(guān)操作規(guī)則1. 超凈臺(tái)使用遵循預(yù)約原則。在細(xì)胞室入口處預(yù)約，細(xì)胞6、室內(nèi)填寫使用登記。a：無(wú)預(yù)約者若有必要在他人預(yù)約時(shí)段內(nèi)使用，需先征得預(yù)約者的同意，否則應(yīng)無(wú)條件讓出工作臺(tái)，以免耽誤他人實(shí)驗(yàn)。b：使用記號(hào)筆在預(yù)約表格上提前預(yù)約下一周的使用時(shí)間，請(qǐng)注意周六周日是指上周的周末。c：預(yù)約內(nèi)容請(qǐng)包括：時(shí)間范圍，姓名，如特殊實(shí)驗(yàn)請(qǐng)寫明。2. 超凈臺(tái)使用前用紫外燈照射15分鐘滅菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作區(qū)消毒，所有物品放入超凈臺(tái)內(nèi)使用前均應(yīng)消毒，超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)禁堆放過多物品影響風(fēng)路平衡，不同超凈臺(tái)內(nèi)物品嚴(yán)禁頻繁交換使用。3. 點(diǎn)燃酒精燈前需檢查瓶中酒精是否足夠，液面應(yīng)占瓶高1/3-2/3。注： 消毒用75%的酒精，酒精燈用95%以上的酒精，向噴壺或燈內(nèi)添加酒精時(shí)請(qǐng)留意7、。4. 超凈臺(tái)中應(yīng)擺放廢液杯，用于暫時(shí)存放廢棄物，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將杯內(nèi)加入NaOH溶液處理片刻，廢液垃圾倒入水池并同時(shí)用水沖釋，固體垃圾倒入生物樣品專用垃圾桶中注：廢液缸應(yīng)及時(shí)處理，嚴(yán)禁長(zhǎng)時(shí)間放置，以免留有大量培養(yǎng)液滋生細(xì)菌。5. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)后任何含有細(xì)胞培養(yǎng)污物的培養(yǎng)瓶，離心管，移液管等必須及時(shí)帶出細(xì)胞房。第五條 器具的清洗規(guī)則1. 可回收的移液管、離心管、培養(yǎng)瓶皿等，放入裝有清水的塑料桶中浸泡，桶內(nèi)需有足量的清水以沒過浸泡物品。注：可回收器皿必要時(shí)先初步涮洗后再放入桶內(nèi)，尤其是培養(yǎng)瓶或血清管中有大量高營(yíng)養(yǎng)的液體殘留時(shí)，容易使桶內(nèi)的清水長(zhǎng)菌。保證浸泡的瓶、管內(nèi)完全被清水充滿，而不是在裝有大量空氣的8、情況下被壓倒桶底。 2.清水沖洗后及時(shí)放入酸缸浸泡，應(yīng)由使用者本人及時(shí)清洗晾干備用，操作時(shí)請(qǐng)注意帶橡膠手套，小心操作。注： 禁止長(zhǎng)時(shí)間浸泡于清水中，此時(shí)細(xì)菌可能已在桶中生長(zhǎng)并釋放內(nèi)毒素。細(xì)菌內(nèi)毒素很難通過常規(guī)濕熱滅菌步驟去除干凈，即使干烤也不能保證其完全失活。內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)及多種實(shí)驗(yàn)均有較大影響。洗滌程序：清水沖十次以上去除重金屬殘留，然后沖去離子水5次，再用超純水5次，倒置于烘箱中晾干。并及時(shí)包扎滅菌。第六條 冰箱、試劑等相關(guān)操作規(guī)則1. 從冰箱取放物品動(dòng)作要迅速，關(guān)門時(shí)要檢查門是否關(guān)好。按類別存放試劑。嚴(yán)禁長(zhǎng)時(shí)間敞開冰箱門。2. 各人存放于冰箱內(nèi)的培養(yǎng)液、生化試劑、樣品要注明姓名、配制日9、期、樣品名稱，特殊試劑需獲得細(xì)胞室管理人員同意后方能放置。不得使用他人的培養(yǎng)液或其他生化試劑。3.分裝好的血清長(zhǎng)時(shí)間保存于-80，使用前放于4預(yù)解凍。原則上解凍好的血清應(yīng)全部配成含血清的培養(yǎng)基備用，若有剩余，則暫存于4并盡快使用。盡量不要使用他人開過的血清，以免交叉污染。4. 細(xì)胞室內(nèi)的冰箱空間有限，盡量?jī)H放置使用頻率較高的試劑。請(qǐng)勿將一些閑置試劑，污染試劑長(zhǎng)期放置在細(xì)胞室。5. 工作人員會(huì)定期對(duì)冰箱進(jìn)行清理，發(fā)現(xiàn)無(wú)標(biāo)記，過期試劑等違規(guī)物品將全部清除出去，并且查找試劑配置人給予警告。第七條 進(jìn)入細(xì)胞室物品控制1. 所有進(jìn)入細(xì)胞室的物品需經(jīng)過傳遞窗，盡量經(jīng)過紫外照射，酒精表面消毒。2. 嚴(yán)禁將可10、能含有污染物或病原菌的實(shí)驗(yàn)物品帶入細(xì)胞室。3. 細(xì)胞室內(nèi)僅放置少量實(shí)驗(yàn)必須耗材即可，不得整箱搬入，出現(xiàn)潔凈室內(nèi)物品堆積狀況。4. 細(xì)胞室內(nèi)儲(chǔ)物柜的物品放置由相關(guān)管理人員安排，并做標(biāo)記。第八條 細(xì)胞室清潔守則1.每周值日生時(shí)間從周六開始，至下周五結(jié)束。2.日常維護(hù)：注意培養(yǎng)箱顯示正常，顯微鏡，冰箱，超凈臺(tái)的正常使用與維護(hù)。細(xì)胞室內(nèi)以及門口生物樣品專用垃圾桶的及時(shí)清理。3. 每周大清潔：每周五下午五點(diǎn)用新潔爾滅打掃細(xì)胞室。清潔順序：擦超凈臺(tái)（用酒精棉球）；用新潔爾滅擦桌面，培養(yǎng)箱，超凈臺(tái)以及冰箱外壁，及桌上的儀器，細(xì)胞室墻面，傳遞窗，風(fēng)淋室；給水浴鍋加水或換水，細(xì)胞室衣柜和拖鞋擺放整齊，拖地，紫外11、消毒細(xì)胞室30分鐘。注：若上周值日生及時(shí)給培養(yǎng)箱內(nèi)水槽加足水，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)未來一周內(nèi)培養(yǎng)箱不會(huì)干水，但值日生仍應(yīng)經(jīng)常檢查，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)異常情況。切記給培養(yǎng)箱加滅菌水。4. 在沒有出現(xiàn)問題的情況下，每2個(gè)月清潔一次培養(yǎng)箱：先將培養(yǎng)箱中的物品取出暫存于超凈臺(tái)內(nèi)，對(duì)于比較敏感的細(xì)胞可以暫存于另一個(gè)培養(yǎng)箱；將培養(yǎng)箱內(nèi)的不銹鋼板取出，包括4塊橫板和左右2塊立著的架子，用酒精棉球清潔鋼板和培養(yǎng)箱內(nèi)壁；啟動(dòng)培養(yǎng)箱自消程序。第九條 人員培訓(xùn)1. 由將要做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的人員提出申請(qǐng)，填寫細(xì)胞培養(yǎng)室使用申請(qǐng)表。2. 細(xì)胞室負(fù)責(zé)老師視申請(qǐng)人數(shù)酌情安排培訓(xùn)時(shí)間，培訓(xùn)內(nèi)容包括安全培訓(xùn)、理論知識(shí)與實(shí)踐操作培訓(xùn)。3. 培訓(xùn)考核合格12、后由導(dǎo)師、培訓(xùn)老師、細(xì)胞室負(fù)責(zé)人簽字確認(rèn)授予其細(xì)胞室使用權(quán)限。4. 培訓(xùn)不合格者重新參加培訓(xùn)。第十條 制度的實(shí)施與處罰1. 細(xì)胞室負(fù)責(zé)人以及管理人員密切關(guān)注細(xì)胞室的使用情況，發(fā)現(xiàn)違反規(guī)章操作者首先給予提醒，但須做記錄。2. 對(duì)于一周內(nèi)違反3次以內(nèi)者予以警告，3-5次者給予停止細(xì)胞室使用權(quán)限2周，超過5次者停用其對(duì)細(xì)胞室使用權(quán)限，需重新參加培訓(xùn)后才能再次使用。第三章 附則本規(guī)章制度從公布之日起開始執(zhí)行，由生物醫(yī)學(xué)工程團(tuán)隊(duì)實(shí)驗(yàn)室管理委員會(huì)負(fù)責(zé)解釋及更正。本實(shí)驗(yàn)室追求不斷地進(jìn)步，各位老師及使用人員若有良好的建議可與細(xì)胞室負(fù)責(zé)人或?qū)嶒?yàn)室管理委員會(huì)成員溝通，我們會(huì)及時(shí)協(xié)調(diào)，旨在為團(tuán)隊(duì)提供和諧，高效的實(shí)驗(yàn)13、條件。生物醫(yī)學(xué)工程實(shí)驗(yàn)室管理委員會(huì) 二零一一年十二月二十一日訂細(xì)胞培養(yǎng)室使用申請(qǐng)表編號(hào)：申請(qǐng)人：性別：職務(wù)：教師/學(xué)生職稱/年級(jí)：導(dǎo)師：聯(lián)系電話：Email：實(shí)驗(yàn)內(nèi)容原代培養(yǎng) 傳代培養(yǎng) 正常體細(xì)胞培養(yǎng) 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng) 干細(xì)胞培養(yǎng)克隆培養(yǎng) 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞融合 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 其他 使用時(shí) 間年 月 日 年 月 日出 入頻 率每天一次 每天兩次一周兩次 一周三次培訓(xùn)安 排l 需要 不需要申 請(qǐng)培 訓(xùn)時(shí) 間年 月 日 年 月 日申請(qǐng)人簽字本人承諾：將嚴(yán)格遵守細(xì)胞培養(yǎng)室管理規(guī)章制度，服從管理；如有違反，愿接受相關(guān)處罰。簽名： 年 月 日導(dǎo)師意 見及培訓(xùn)后確認(rèn)（請(qǐng)對(duì)學(xué)生能否申請(qǐng)培訓(xùn)予以確認(rèn)）簽字：年 月 日（請(qǐng)承諾對(duì)學(xué)生使用細(xì)胞房過程中的規(guī)范操作予以督促）簽字：年 月 日培訓(xùn)老師意見（請(qǐng)對(duì)學(xué)生能否達(dá)到規(guī)范使用細(xì)胞室予以評(píng)價(jià)）簽字： 年 月 日細(xì)胞室負(fù)責(zé)人意 見（如同意使用，請(qǐng)?zhí)顚憣?duì)使用者的要求與責(zé)任；如不同意使用，請(qǐng)寫明具體理由。）簽字： 年 月 日備注注：本表一式3份，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人一份，導(dǎo)師和本人一份，實(shí)驗(yàn)室委員會(huì)存檔一份。