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1、生物公司檢定菌種傳代接種管理制度編 制： 審 核： 批 準(zhǔn)： 版 本 號(hào): ESZAQDGF001 編 制： 審 核： 批 準(zhǔn)： 版 本 號(hào): 1 目的 規(guī)范檢定菌的管理制度，保證菌種的正常。2 范圍化驗(yàn)室使用的菌種。3 責(zé)任 化驗(yàn)室主管、化驗(yàn)員。4 制度4.1 菌種的購(gòu)買(mǎi)和接收4.1.1 檢定菌應(yīng)到中國(guó)藥品生物制品檢定所或當(dāng)?shù)厮帣z所購(gòu)買(mǎi)。 檢定菌應(yīng)設(shè)專(zhuān)人保管，此人應(yīng)受過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，有足夠的菌種保存經(jīng)驗(yàn)。 接收菌種時(shí)，應(yīng)核實(shí)菌種的名稱(chēng)、編號(hào)、形態(tài)特征等，并調(diào)查清楚菌種的保存條件和注意事項(xiàng)。 填寫(xiě)菌種接收登記表。內(nèi)容有：菌種名稱(chēng)、菌種編號(hào)、菌種批號(hào)、購(gòu)買(mǎi)日期、菌種來(lái)源等。4.2 菌種保存4.2.12、 菌種上應(yīng)貼上明顯的標(biāo)簽，標(biāo)明名稱(chēng)、編號(hào)、購(gòu)買(mǎi)日期等。4.2.2 菌種保藏分四個(gè)階段：挑選特征典型的純菌菌落；確定保藏的合適菌體形態(tài)，孢子和芽胞代謝作用較弱，同時(shí)對(duì)惡劣環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力，因此對(duì)凡是能產(chǎn)生孢子或芽胞的微生物都用孢子和芽胞進(jìn)行保藏；選擇最適宜的保藏法進(jìn)行保藏；定期對(duì)保藏菌種進(jìn)行檢查，觀察是否發(fā)生變化，若有變化，需改變保藏方法，保藏期滿(mǎn)應(yīng)及時(shí)進(jìn)行移種。4.2.3菌種復(fù)蘇參考方法：干菌種（0代）用100ml液體培養(yǎng)基復(fù)蘇（1代），加入100ml40%無(wú)菌甘油，混勻，小量分裝，于-20冷凍保存。每次使用取一支自然（室溫）解凍，取0.1ml接種至10ml液體培養(yǎng)基，按規(guī)定培養(yǎng)、稀釋?zhuān)?代3、）。解凍后的菌種不能重復(fù)冷凍，傳代后應(yīng)進(jìn)行滅活。4.2.4一般采用瓊脂斜面低溫保藏法：將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在新鮮的瓊脂斜面、液體或半固體培養(yǎng)基中，按規(guī)定的溫度和時(shí)間培養(yǎng)，待充分生長(zhǎng)后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種管用牛皮紙包好，為減緩培養(yǎng)基的水分蒸發(fā)，延長(zhǎng)保藏時(shí)間，可將菌種保藏管的棉花塞換成無(wú)菌橡膠塞，放在4左右的冰箱內(nèi)保藏。本法適用于經(jīng)常使用的細(xì)菌、酵母菌、放線(xiàn)菌和霉菌保藏，各類(lèi)菌種保藏條件及時(shí)間見(jiàn)附表1：各類(lèi)細(xì)菌保藏條件與時(shí)限4.2.5 每天檢查一次保存菌種的冰箱溫度，并作記錄，每周檢查菌種管的棉塞是否松動(dòng)，菌種外觀及干燥狀態(tài)，如有異常應(yīng)及時(shí)處理，并填寫(xiě)菌種檢查記錄。4.2.6 每次移植培4、養(yǎng)后，要與原種的編號(hào)、名稱(chēng)逐一核對(duì)，確認(rèn)培養(yǎng)特征和溫度無(wú)誤后，再繼續(xù)保存。4.3 菌種的傳代、接種和使用4.3.1 每株菌種應(yīng)建立菌種使用及傳代記錄，斜面菌種應(yīng)根據(jù)其特性決定傳代時(shí)間間隔，細(xì)菌一般一個(gè)月，其它見(jiàn)附表1：各類(lèi)菌種保存溫度與時(shí)限。4.3.2 傳代時(shí)使用須核對(duì)名稱(chēng)、編號(hào)，傳代代數(shù)及日期，所用培養(yǎng)基。4.3.3 傳代和接種規(guī)程4.3.3.1 先點(diǎn)燃酒精燈，在火焰旁的上部空間操作，燒灼接種環(huán)。4.3.3.2 再將原有的菌種斜面培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱(chēng)菌種管）與待接種的新鮮斜面培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱(chēng)接種管），持在左手拇指、食指及中指之間，要注意能清楚地觀察到斜面，菌種管在前，接種管在后，應(yīng)斜持試管呈45角，使試5、管內(nèi)斜面向上，兩試管口平齊，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸濕培養(yǎng)基表面。4.3.3.3 首先，以右手在火焰旁轉(zhuǎn)動(dòng)兩管的棉塞，以便接種時(shí)易于拔取。再以右手持接種環(huán)的柄端，垂直或稍斜地把接種環(huán)在火焰上燒灼。頂端的環(huán)必須燒紅，以徹底滅菌。環(huán)以上凡接種時(shí)可進(jìn)入試管的部分，也應(yīng)通過(guò)火焰燒灼。燒灼時(shí)，應(yīng)把環(huán)置于酒精燈的外焰上，因外焰的濃度比內(nèi)焰高，容易燒紅。4.3.3.4 使用右手的小指和手掌之間以及無(wú)名指與小指之間，在火焰旁分別拔出兩支試管的棉塞，持住，再將試管口在火焰上通過(guò)，以殺滅管口可能沾污的細(xì)菌，但勿燒燙。4.3.3.5 先將燒灼過(guò)的接種環(huán)插入菌種管內(nèi)，先接觸無(wú)菌苔生長(zhǎng)的培養(yǎng)基土，如有熔印則表6、明接種環(huán)未冷卻能燙死細(xì)菌。一定待冷后，再?gòu)男泵嫔咸羧【ι僭S，取出時(shí)接種環(huán)不能通過(guò)火焰，應(yīng)從火焰旁迅速插入接種管，在斜面上輕輕劃線(xiàn)接種。劃線(xiàn)時(shí)，一般先由下而上劃一直線(xiàn)后，再由下而上劃曲線(xiàn)。操作過(guò)程應(yīng)迅速，勿使菌苔粘至管壁或管口。4.3.3.6 當(dāng)接種完畢，立即將管口通過(guò)火焰滅菌，右手到火焰旁塞上棉塞，不要將管口離開(kāi)火焰旁去迎接右手的棉塞。最后將接種環(huán)燒灼滅菌放置原處，再把可能未塞緊的棉塞塞緊，即可進(jìn)行培養(yǎng)。.7 操作過(guò)程中，如因不慎使棉塞觸及火焰而著火，卻勿用口吹，須在剛剛著火時(shí)迅速塞入試管，因管內(nèi)氧氣不足會(huì)很快熄滅。若棉塞外端著火，可用手捏熄。若棉塞燒壞不宜再用，可另取未接種斜面培養(yǎng)基上的滅7、菌棉塞，代替塞上。4.3.3.8 傳代和接種使用后，應(yīng)填寫(xiě)檢定菌種接收、傳代登記表及檢定菌使用記錄。4.3.4 控制傳代次數(shù)，傳代次數(shù)越多，突變的幾率越大，因此要盡量少傳代；根據(jù)菌種特性和實(shí)際保存情況，一般最多傳代不超過(guò)5代，超過(guò)此次數(shù)，應(yīng)加熱滅活。4.3.5 做完抗生素微生物檢定后試驗(yàn)用的菌液以及測(cè)量完抑菌圈后的培養(yǎng)皿，陽(yáng)性菌對(duì)照廢棄物，要滅活處理。4.3.6 菌種有異常情況或有雜菌生長(zhǎng)，則應(yīng)隨時(shí)更代，并可在傳代中，選擇典型菌種作傳代菌種。附：檢定菌種接收、傳代登記表（編碼：142 ） 菌種檢查記錄（編碼：143（1） ） 檢定菌使用記錄（編碼：143（2） ）附表1：各類(lèi)細(xì)菌保藏條件與時(shí)限8、菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度傳種時(shí)間細(xì)菌多用營(yíng)養(yǎng)瓊脂，或根據(jù)菌種規(guī)定選用培養(yǎng)基46芽胞桿菌36個(gè)月, 其它細(xì)菌每個(gè)月放線(xiàn)菌多用高氏合成1號(hào)瓊脂、察氏瓊脂、PDA瓊脂46每3個(gè)月移植一次酵母菌麥芽汁瓊脂、麥芽汁酵母膏瓊脂4646個(gè)月移植一次絲狀真菌PDA瓊脂，察氏瓊脂、麥芽汁瓊脂46（20）每4個(gè)月移植一次(每2個(gè)月移植一次)擔(dān)子菌一般用PDA瓊脂或綜合馬鈴薯培養(yǎng)基46（20）每3個(gè)月（每2個(gè)月）檢定菌種接、傳代登記表142 01菌種名稱(chēng)菌種編號(hào)批號(hào)菌種來(lái)源購(gòu)買(mǎi)日期接收人接收日期復(fù)蘇操作者復(fù)蘇日期復(fù)蘇菌種（1代）數(shù)量保藏條件傳代日期代數(shù)傳代數(shù)量培養(yǎng)溫度（）培養(yǎng)時(shí)間（h）培養(yǎng)特征操作者備注菌種檢查記錄143（1） 02菌種名稱(chēng)菌種批號(hào)菌種代數(shù)檢查日期菌種塞是否松動(dòng)、生霉菌種形態(tài)是否正常檢查人備 注滅活條件：菌種滅活時(shí)間：操作人：檢定菌使用記錄143（2） 02菌種名稱(chēng)批 號(hào)菌種代數(shù)領(lǐng)用日期領(lǐng)用菌種及配制菌液領(lǐng)用人發(fā)放人備 注